小儿急性白血病免疫表型和骨髓细胞DNA含量测定的临床意义

作者：陈日玲　陈铭珍　蔡康荣　李峰目的　
　　［关　键　词］　白血病；免疫表型；异倍体；细胞周期
　　［分类号］　R733.7　　［文献标识码］　A
　　［文章编号］　1008-8830(2000)01-0001-03
Clinical Significance of Myelocytic DNA Content Immunophenotype in Children with Acute Leukemia

　　［摘　要］　分析小儿急性白血病(AL)的免疫表型、异倍体、细胞周期分布状况的临床意义。方法　应用流式细胞仪检测了42例初诊为AL患儿的免疫表型及骨髓单个核细胞(MNC)的DNA含量。结果　B-ALL明显多于T-ALL，髓系抗原在ANLL组中的表达率依次为CD₃₃>CD₁₃>CD₁₄>CD₁₅。4例AL同时表达了淋系和髓系的抗原，预后差。AL患儿骨髓细胞周期的S期细胞比例(S%)明显低于正常对照，说明AL患儿白血病细胞的增殖能力低下。ALL组中，亚倍体的S%均值与超二倍体、二倍体比较存在显著差异性，ANLL组中，CD₃₃/CD₁₃<1者的S%均值与CD₃₃/CD₁₃>1者比较亦存在显著差异。结论　AL患儿的免疫表型、倍体关系、细胞周期及其之间的关系，对临床诊断、治疗、预后判断具有重要指导意义。

CHEN Ri-Ling, CHEN Min-Zhen, CAI Kang-Rong, et al.
(Department of pediatrics, Affiliated Hospital, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001)　　白血病的细胞免疫表型、倍体分析、细胞周期各时相的分布及其之间的关系，与临床的诊断、治疗、预后有着密切的关系。本实验应用流式细胞仪检测了42例初诊为急性白血病(AL)患儿的免疫表型及骨髓单个核细胞(MNC)的DNA含量，分析小儿AL的免疫表型、异倍体、细胞周期分布状况及其它们之间的相互关系，进一步探讨其对临床诊断、药物治疗、预后判断的指导意义。

Abstract:　Objective　
Key words:Acute leukemia; Immunophenotype; Aneuploidy; Cell circle distribution To analyse the clinical significance of the immunophenotype, aneuploidy and cell circle distribution in children with acute leukemia (AL). MethodsWith the techniques of flow cytometry (FCM), the immunophenotype and the DNA content in bone marrow mononuclear cells were determined in 42 cases of confirmed AL patients. ResultsThe expression frequency of myeloid antigens in the ANLL group was CD₃₃>CD₁₃>CD₁₄>CD₁₅. Both lymphoid and myeloid antigen were expressed in the 4 AL patients with poor prognosis. The percentage of myelocytic circles (S%) in AL patients was significantly lower than in normal controls, indicating hemopoietic hypofunction in AL patients. The S% medium of hypodiploidy in the ALL group was significantly different compared with that of hypodiploidy and diploidy in the ALL group. The S% medium in patients with CD₃₃/CD₁₃>1 was marked different compared with those with CD₃₃/CD₁₃<1 in the ANLL group. ConclusionsThe analysis of immunophenotype, aneuploidy, and cell circle plays an important role in clinical diagnosis, treatment and prognosis.　　　　

1　对象及方法

1.1　对象
　　初诊AL患儿42例，其中急性淋巴细胞性白血病(ALL)22例，急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)20例。诊断均经临床及实验室检查确诊。年龄2～14岁，平均年龄6.5岁。正常对照15例，为骨髓象正常的非血液病患儿，年龄2～14岁，平均年龄5.1岁。
1.2　方法
1.2.1　免疫表型的测定　选用10种单抗，其中T系相关的有CD₂，cyCD₃，CD₇，淋系相关的有CD₁₀，CD₁₉，CD₂₂，髓系相关的有CD₁₃，CD₁₄，CD₁₅，CD₃₃，兔抗鼠IgG-FITC为二抗，单抗及二抗购自中国医学科学院血液学研究所。取骨髓0.1 ml加McAb 20μl，0～4℃孵育1h后，PBS洗3次，加二抗适量，0～4℃反应30 min，PBS洗3次后溶解红细胞，洗净后应用流式细胞仪检测。结果判断：淋系抗原>30%，髓系抗原>20%定为阳性指标。
1.2.2　DNA含量测定　细胞周期测定：取肝素抗凝骨髓0.5 ml，按常规方法分离单个核细胞(MNC)，每测定管加MNC 10⁶个，然后依次加入DNA测定液(CoulterDNA kit)，室温存30 min，然后加入PI染液(终浓度为100 μl/ml)，室温30 min后上机测定。每个样品测定10 000个细胞，采用Coulter公司提供的DNA分析程度，获取各样本细胞周期时相百分比。倍体分析：本仪器DI(DNA index)值正常范围是0.90～1.10，小于0.90为亚二倍体，大于1.10为超二倍体。
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