陈小荣　周斌　饶雷鸣

摘要：用高效液相色谱法测定了蠲哮片中橙皮甙的含量。采用外标峰面积法，按选定的色谱条件，橙皮甙进样量在 0.16～2.00 μg 范围内，可得良好的线性关系 (r=0.9998)。该法具有重现性好、简单、快速、准确、灵敏的特点。
关键词：蠲哮片/化学；橙皮甙/分析；色谱法，高压液相
中图分类号：R284.1　　　文献标识码：A
文章编号：1003-9783(2000)02-0122-02

　　蠲哮片由葶苈子、青皮、陈皮等七味中药组成，是中国肺系病专业委员会副主任委员，主任中医师洪广祥教授根据中医理论与长期临床实践研究而成，并由江中制药厂生产的中药三类新药，它具有泻肺除壅、涤痰祛瘀、利气平喘的功效，主治支气管哮喘、过敏性哮喘、喘息性支气管炎及阻塞性肺气肿等。在蠲哮片中，陈皮、青皮是臣药，两者用量较大，因橙皮甙为两者的共同主要成分。故采用高效液相色谱法［1，2，3］对制剂中的有效成份橙皮甙的含量进行测定，以控制其内在质量。

1　方法与结果

1.1　仪器与试剂
　　高效液相色谱仪　美国WATERS600E系统(包括WATERS600CONTROLLER，WATERS600PUMP，WATERS486检测器)，WATERSPC800工作站。KQ-250型超声波清洗器。湘仪-岛津电子分析天平。水为重蒸馏水，甲醇(色谱纯，分析纯)，醋酸(分析纯)，橙皮甙对照品(中国药品生物制品检定所提供)。
1.2　色谱条件
　　色谱柱：NOVA-PAKC18(3.9×150mm)，流动相：甲醇-醋酸-水(27∶6∶67)，检测波长：280nm，柱温：30℃，流速：0.6mL/min，灵敏度：0.100AUFS。
　　在此色谱条件下，橙皮甙与其他组份达到基线分离，获得良好的实验效果(图1，图2)。



图1　橙皮甙对照品HPLC图



图2　蠲哮片样品HPLC图谱

1.3　标准溶液的配制
　　精密称取在110℃干燥至恒重的橙皮甙对照品20mg，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，从中精密量取5mL置于25mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀，即得(浓度为80mg/L)。
1.4　样品溶液的制备
　　取蠲哮片5片，除去薄膜衣，然后置研钵中研细，从中精密称取细粉0.5g置于50mL容量瓶中，加入甲醇45mL，超声提取1h，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
1.5　线性关系的考察
　　精密称取橙皮甙对照品20mg，置于50mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容。从中吸取数毫升分别配制成16、32、64、80、160、200mg/L的甲醇溶液。按上述色谱条件分别进样10μL，测定峰面积，以峰面积(R)为横坐标，进样量(C)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程(强制过原点)为：C=3.9687×10-7R，r＝0.9998。
　　表明橙皮甙在0.16～2.00μg范围内具有良好的线性关系。计算方法为外标一点法。
1.6　精密度试验
　　精密吸取橙皮甙对照品溶液10μL(浓度为120g/L)，重复进样5次，橙皮甙峰面积积分值的相对标准偏差(RSD)为1.3%。
1.7　回收率试验
　　采用加样回收法，精密称取已知含量的蠲哮片细粉0.5g，分别精密加入一定量的橙皮甙对照品，按上述方法进行测定，计算回收率，同法测定5次，结果表明，本法平均回收率为99.75%，RSD=1.11%。
1.8　重现性试验
　　精密吸取蠲哮片细粉0.5g，按上法测定含量，重复取样测定5次，样品中橙皮甙含量的相对标准偏差为1.16%。
1.9　样品测定
　　取10批蠲哮片样品，分别依法测定其含量，结果分别为1.88，1.96，2.10，1.76，2.01，1.79，1.96，1.83，1.89，1.92mg/片，因此，确定蠲哮片中橙皮甙的含量限度为1.6mg/片。

2　讨论

2.1　考察不同超声时间对含量的影响时，操作方法同样品测定项下，超声处理时间分别为20、40、60、80min，分别测定其橙皮甙含量(N=3)。结果表明20、40min提取不够充分，60、80min提取效果无明显差别，所以我们选用超声60min的处理条件。
2.2　我们采用甲醇、醋酸、水为流动相。因为橙皮甙在甲醇中有较大的溶解度，醋酸对橙皮甙有增溶作用，通过实验，我们发现当醋酸含量超过10%时，出峰太快，不利于橙皮甙的分离，而且因其pH值偏大而对色谱柱有损害，当醋酸含量低于4%时，则其色谱峰分辨率下降。因此本次实验，我们采用甲醇：醋酸：水(27∶6∶67)为流动相，分离效果良好。

作者简介：陈小荣(1969-)，主管药师，从事质量分析及制剂工艺研究
作者单位：陈小荣（江西江中制药厂 药物研究所，南昌 330077）　
　　　　　周斌（江西中医学院，南昌 330006）　
　　　　　饶雷鸣（江西中医学院，南昌 330006）

参考文献：

［1］梁生旺，刘伟.中药制剂定量分析［M］.北京：中国中医药出版社，1997.219.
［2］欧阳强，邱黎和，周郗竹.高效液相色谱法测定枳实、枳术丸中橙皮甙的含量［J］.中成药，1996，18(7)：9.
［3］崔铉玖，迟彦春，金银河.HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中橙皮甙的含量［J］.药物分析杂志，1996，16(5)：321.


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